ABSTRACT
Introdução: A nefrocalcina (NC) é uma glicoproteína urinária que desempenha papel importante na inibição da cristalização do oxalato de cálcio (OxCa). A NC ocorre em pelo menos quatro isoformas (NC-A, B, C e D). As isoformas da NC são fosfoproteínas, mas a quantidade anormalmente elevada de resíduos de fosfato, em especial nas NC-C e D é intrigante. A NC poderia revestir a superfície de células epiteliais renais para evitar adesão de cristais de OxCa e conjugar fosfolípides da membrana em sua molécula. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar os fosfolipídios presentes na molécula de NC. Material e Métodos: A NC e suas isoformas foram isoladas da urina de indivíduo não portador de nefrolitíase. O conteúdo de fosfato foi determinado em cada isoforma. A taxa de inibição de crescimento de cristais de OxCa causada pela NC foi medida pelo consumo do ácido oxálico. A separação de lipídios, fosfolípides e proteínas foi realizada utilizando-se o método de separação Triton X-114. Resultados: Foram identificados os seguintes compostos: fosfatidilcolina, fosfoeta-nolamina, fosfatidilinositol, triglicérides e lipídios neutros. A composição de aminoácidos das isoformas da NC não se alterou. Após a extração com Triton X-114, os resíduos de fosfato das isoformas B, C e D diminuíram quase 1/10 do valor original e os da isoforma A não se alteraram. A constante de dissociação em direção ao oxalato de cálcio não foi alterada. Conclusão: Estes dados indicam a presença de fosfolípides típicos de membrana celular presentes na molécula de NC. A NC, incluindo-se todas as suas isoformas, pode ser uma proteína ligada à membrana, ao conjugar fosfolípides e revestir a superfície de células epiteliais tubulares.
Introduction: Nephrocalcin (NC) is a urinary glycoprotein that plays an important role in the inhibition of calcium oxalate crystallization. NC occurs in at least four isoforms (NC-A, -B, -C, and -D). NC isoforms are phosphoproteins, but the abnormally high phosphate residues, particularly in NC-C and NC-D, are intriguing. It is possible that NC molecules could coat the surface of renal epithelial cells for preventing attachment of calcium oxalate crystals, and could conjugate membrane phospholipids (PL). Our objective was to identify and characterize PL in NC. Material and Methods: NC and its four isoforms were isolated from non-stone forming urine. Phosphate contents were determined. Crystal growth inhibition rate of NC toward calcium oxalate monohydrate crystals (COM) was measured by decrease of oxalic acid. Phase separation of lipids and PL from proteins was carried out by a phase separation method using Triton X-114. Results: The following compounds were identified: phosphatidylcholine, phosphoethanolamine, phosphatidylinositol, triglycerides, and neutral lipids. Amino acid composition of the four NC isoforms before and after extraction did not change. After Triton X-114 extraction, phosphate residues in isoforms B, C, and D were decreased nearly 1/10 of the original value. However, isoform A phosphate residues showed no change. Dissociation constant toward calcium oxalate was not significantly altered. Conclusions: These data indicate the presence of typical membrane PL in NC molecule. NC, including all its isoforms, could be a membrane bound protein, conjugating membrane PL and coating the surface of the epithelial renal cells.